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수혈의학 실습 보고서

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▶ ABO, Rh 혈액형 검사 (혈구형 / 혈청형)

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 실험 목적 : 혈액의 ABO항원과 Rh항원의 유무 판별.

 준비물 : EDTA tube, 채혈도구, Anti A,B,D(Rh) 시약, 원심분리기, 혈청분리관, 피펫, 1.5ml tube, 15ml tube

 총 사용 혈액 : 실험자 혈액 EDTA 1통 A형 EDTA 1통, B형 EDTA 1통.

 실험 방법1 (혈구형)

실험자 혈액(EDTA)샘플을 2,500rpm에 5분간 원심시킨다.

혈청 분리관으로 혈장을 옮겨놓고(혈청형 검사때 사용), Buffy coat층을 제거한다.

생리식염수로 3회 세척한다.

세척 적혈구를 이용하여 50% 혈구 부유액을 제조한다.

혈액형 검사 Plate에 제작한 50%혈구 부유액을 각각 200ul씩 떨어뜨리고 혈구형 검사 시약 3가지를 동량 넣는다. (pipet 이용)

Applicator로 시약과 혈액을 섞어서 결과를 관찰한다.

 실험 결과

  실험 방법2 (혈청형 Plate법)

혈구형 검사 실험과정 1~3번처럼 A,B형 세척 혈구를 만든다.

세척혈구로 A,B 5% 혈구 부유액을 제작한다. (세척혈구 500ul + 9.5ml Saline)

혈구형 검사 실험과정 2번에서 얻은 실험자 혈장을 Plate에 100ul씩 2곳에 떨어뜨린다.

각각의 혈장에 5% A,B 혈구 부유액 100ul를 넣어준다.

어느정도 반응시간 (약 30s~1min)을 주고 applicator로 섞어준 뒤 결과를 관찰한다.

 실험 결과

  실험 방법3 (혈청형 Tube법)

시험관 두 개에 각각 A와 B로 표시한다.

A 시험관에는 A cell, B 시험관에는 B cell 5%부유액을 혈청 분리관으로 한방울 넣는다.

3. 실험자 혈장을 2방울 넣는다.

4. 시험관을 잘 혼합한 후 3,400rpm에 15초간 원심분리한다.

5. 상층부에 용혈 유무 확인 후 시험관을 기울려 응집 유무를 관찰한다 (살짝 흔들어 본다)

※살짝 흔드는 이유는 원심분리하면 응집되지 않는 샘플도 가라앉아 응집된것처럼 보이기 때문이다.

 실험 결과

 최종 결과 판독

ABO판정 : A

Rh판정 : Rh+

 최종 결과 토의

-D항원(Rh)검사에서는 ABO보다 역가가 낮아서 응집력이 Anti-A에서보다는 낮았다.

-혈청형 검사는 Plate법보다 시험관법이 더 결과관찰이 용이했다.

▶ 아형 검사

 실험 목적 : 인위적으로 만든 아형이 혈액형 검사에서 어떤 성상을 나타내는지 본다.

 준비물 : EDTA tube, 채혈도구, Anti A,B,D 시약, 원심분리기, 혈청분리관, 피펫, 1.5ml tube, 15ml tube, 12ml 시험관,

 총 사용 혈액 : 실험자 혈액EDTA 2통 (A Rh+)

 실험 방법1 (혈구아형 제작)

채혈한 혈액을 2,500rpm에 5분간 원심분리하고 혈장을 옮긴다.

Buffy coat층을 제거하고 Saline으로 3회 세척한다.

세척한 혈구를 1.5ml tube에 200ul 옮긴다.

Saline을 200ul 첨가하여 혈구을 희석한뒤 마찬가지로 계대 희석으로 x2,4,8,16,32 희석한 혈구를 만든다.

 실험 방법2 (혈장아형 제작)

원심분리하여 얻은 혈장을 깨끗한 l.5ml tube에 200ul를 분주한다.

Saline으로 계대희석하여 2~32배 희석혈장을 제작한다.

 실험 방법3 (아형 혈구형 검사)

제작한 아형 혈구 샘플로 50% 혈구 부유액을 제조한다.

혈액형 검사 Plate에 제작한 50%혈구 부유액들을 각각 100ul씩 떨어뜨리고 혈구형 검사 시약 3가지를 동량 넣는다. (pipet 이용)

Applicator로 섞어준 뒤 결과를 확인한다.

 실험 결과

  결과 토의

희석한 배율이 커질수록 응집력이 작아졌다.

D항원(Rh)의 역가가 ABO보다 낮기 때문에 응집력에서 차이가 있다.

이 결과를 토대로 항원수가 부족한 A형 아형(A1,A2,A3...등)과 Weak D같은 아형을 생각 할 수 있다.

 실험 방법4 (아형 혈청형 검사)

제조한 아형 혈장 샘플당 2개의 시험관을 준비한후 각각 A,B를 표시한다.

각 시험관에 아형혈장을 종류별로 200ul넣어주고 A,B 5% 혈구 부유액을 100uL씩 넣어준다.

조심스럽게 혼합한 후 3,400rpm에서 15초간 원심분리한다.

원심분리 후 용혈 유무 확인 후 시험관을 살짝 흔들어준 후 기울려 응집 유무를 관찰한다.

 실험 결과

 결과 토의

A형 혈액의 혈장을 사용하여 A cell에서는 응집을 관찰 할 수 없다.

희석 배수에 따라 응집력이 낮아졌다. (단 원액과 2배희석 혈장의 응집 여부는 크게 차이가 없었다)

혈장이 희석될수록 항체수가 줄어든다는 것을 알 수 있다.

혈액 ,수혈 실습 계획서.pptx

3학년 혈액학.hwp