실습 3주차

남서울대학교 임상병리과

14102946 김 동 윤

실습 1. 다음 용액의 제조에 필요한 용질의 양을 구한다.

1) 0.05 % potassium metabisulffite 500ml = (0.05 x 500 = 0.25)

2) 0.25 % light grenn 1000 ml = ( 0.25 x 1000 = 250ml)

3) 3% alcian blue (1% acetic acid에 용해) 500ml = (3% x 500 = 1500 ml x 0.01 = 15ml)

4) 1:100 sliver nitrate 250ml = 1:100 = x : 250 ( 100 x= 250) x= 2.5

 

실습 2. 다음 용액의 %와 양을 구한다.

5) 1000배 희석한 ammonium hydroxide 7.5ml 는 몇 % 용액인가?

1:1000 = 7.5 : x ( 750=x) (1000배희석 배수 = 750/1000) = 3/4 = 0.75%

6)5% 용액에서 2.5g의 용질이 들어가도록 만들려면 몇 ml 필요한가?

// x= 50ml

7) 200ml 내의 0.2g은 몇 % 용액인가? 0.04%

 

실습 3. 다음 용액을 제조한다

8) 10% frerric chloride용액을 사용하여 2% 용액 50ml 제조

1:10 = 2 : 50 ( 20x=50) x=25ml

9) 80% alcohol을 사용하여 60% 용액 500ml 제조

(20 / 알코올 80) = 80% (500ml = 240ml / 알코올 260ml)

10) 20% formalin 100ml10% 용액으로 제조 (20:80 = 10: x)

x= 40

 

실습 4. 다음 용액을 제조한다

11) 1% alcain blue 100ml 현재 염료의 염료농도는 80% 새염료의 농도는 86%

1:100= x :86 // 100x = 86 // x =0.86

12) 0.5% acid fuchsin 250ml ,현재 염료농도는 82% ,새 염료의 농도는 88%

0.5:250 = 1.25g / 1.25:82= x:88 // 82x=110 // x= 10.34

 

실습 5.각각의 화학물질 1M1N 용액 1000 ml를 만드는 필요한 용질의 양을 구한다.

13)Nacl = 58.44 14) Cacl2 = 110.98 15) Caso4 =136.14

16)Caso4 . 2h2o = 170.14 17) h2so4 = 65 18)k2c03=138.21 19) A(OH)3= 74.98

 

실습 6. 다음용액을 제조하는데 필요한 용질양을 구하여라

20) 0.1N h2so4 200ml = 130 ml

21) 0.5N caO 500ml = 280.4 ml

22) 0.2N KCI 100 ml = 14.91

23) 0.5N AICI3 200 ml = 124.86

 

실습 7. 다음 미터법과 US 제도를 변환한다

24) 1dg = 0.01mg

25) 1 cm = 10 mm

26) 1 ul = 1000ml

27) 1kg = 2.20459ib

28) 6 in = 6.9128cm

29) 350 mg = 3500g

30) 5 um = 50mm

31) 1mm = 100cm

32) 1ml = 1cc

33) 5 mm = 5.50323in

34) 1km = 1000000mm

 

실습 8. 다음 온도를 변환한다.

35) -20화씨로 = - 68

36) 4화씨로 =39.2

37) 72를 섭씨로 =22.222222

38) 20를 섭씨로 =-6.666667

 

실습 9. picric acid 포화수용액 1000ml

2:8 = x:1000 /// 8x= 1000 // x = 125ml

 

실습 10. 현미경의 각 부의 명칭과 관리법에 관하여 기술


1. 고온 , 고습 및 직사광선은 피한다.

2.사용후에는 대물렌즈를 저배율로 돌려 놓습니다.

3. 대안렌즈 및 현미경 전체를 덮을 수 있는 비닐이나 헝겊으로 덮어 먼지가 쌓이지 않도록 합니다.

3. 눈이나 피부(, 얼굴 등) 렌즈에 닿지 않도록 주의합니다.

 

4.렌즈전용 세정제를 면봉에 뭍혀 렌즈를 세척하고 렌즈 전용 세정제를 사용하는 것이 좋으나 없을 경우에는 일반 소독용 알코올을 사용합니다.

5. 관찰이 시작되면 현미경의 위치를 옮기지 않는다.

6. 현미경을 옮길때는 한 손으로 다리를 받치고, 다른 한손으로 손잡이를 잡고 옮겨줍니다.

7. 렌즈는 대게 코팅막이 씌워져 있으므로 코팅막이 벗겨질 경우 코팅을 교체합니다.

2017.32주차 실험 보고서

 

임상병리학과

유 니

 

실습 1. 담당교수님으로부터 실험실 안전 교육을 받는다.

 

실습 2. 일반 안전 수칙이란?

- 실험실로부터 대피할 수 있는 통로가 확보되어야 한다.

- 실험 테이블 위에 유독성 물질을 취급할땐 주의를 기울인다.

- 환기불량, 전기 야기될 수 있는 위험요인에 대하여 실험실을 떠나기 전에 반드시 확인한다.

- 선반이나 테이블위의 시약이 넘어지지 않도록 적절한 안전장치(낙하방지가드)를 한다.

- 전기안전수칙을 지켜 누전사고에 대비한다.

- 실험실은 항상 정리 정돈된 상태로 유지하며, 일상점검 및 정기점검을 실시한다.

 

. 실험실 안전수칙을 숙지하고 가능한 사고를 미연에 방지하기 위한 대책을 숙지

. 반드시 실험복을 착용을 하고, 개인보호구(보안경, 보호장갑, 마스크 등)를 착용

. 실험 시작 전 반드시 일상점검을 생활화 해둔다

. 유해화학물질, 독성물질, 휘발성 유기용매 등은 반드시 후드 내에서 사용해야 합니다.

. 환기, 전기, 수도, 가스 등 위험요인에 대해 실험 시작 전과 퇴실 전에 반드시 확인

. 사용하는 모든 유해물질의 물질안전보건자료

(Material Safety Data Sheets,MSDS)를 비치하고, 취급 전 반드시 숙지

. 소화기, 비상샤워기, 구급함 등의 위치를 파악하고 사용법을 반드시 숙지

. 실험실은 항상 정돈된 상태를 유지하고, 수시로 환기를 시킨다.

 

실습3. 병리실험실에서 발생할수 있는 생물학적 재해, 화학적 재해란?

 

생물학적 재해

위해의료 폐기물

· 조직물류폐기물

· 병리 폐기물

· 손상성 폐기물

· 생물,화학 폐기물

· 혈액오염 폐기물

격리의료 폐기물

 

화학적 재해

· 시약을 테이블에 쏟음 (산성 시약)

· 알코올램프로 인한 화재

· 잘못된 파이펫팅으로 인한 피부손상

· 화학약품의 부주의한 실험으로 인한 피부손상

실습4. 사용할 시약, 염료 등에 대한 MSDS 찾기 유해성 및 취급법에 대한 조사

 

H/E stain

 

탈파라핀(각각 3) - 함수(각각 1) - 수세 (각각 1)

Harris hematoxylin (10~15) -수세(1) - 1%HCL alcohol-4~5회 침적(넣었다 뺐다)

수세(1) -ammonia water or lithium carbonate-4~5회 침적- 청색화 수세(1) -1% eosin(3)

탈수 (1) - 투명(3)- 봉입

 

MSDS (물질안전보건자료)

 

# MSDS(Material Safety Data Sheets)?

 

물질안전보건자료(MSDS)란 화학물질 및 화학물질을 함유한 제제(대상화학물질)의 명칭,

구성성분의 명칭 및 함유량, 안전·보건상의 취급주의 사항, 건강유해성 및 물리적 위험성 등을 설명한 자료

 

# 도입배경

 

화학물질 취급 근로자에게 유해성·위험성 등에 대한 근로자의 알권리(Workers’ Right-to-Know)

확보 및 화학물질로 인한 산업재해 예방

 

# 작성항목

 

1. 화학제품과 회사에 관한 정보

2. 유해성·위험성

3. 구성성분의 명칭 및 함유량

4. 응급조치 요령

5. 폭발·화재 시 대처방법

6. 누출 사고 시 대처방법

7. 취급 및 저장방법

8. 노출방지 및 개인보호구

9. 물리화학적 특성

10. 안정성 및 반응성

11. 독성에 관한 정보

12. 환경에 미치는 영향

13. 폐기시 주의사항

14. 운송에 필요한 정보

 

 

 

Immunohistochemistry 

 

Deparaffinization

1. xylen100% 담긴 유리용기에 슬라이드 넣고 위아래로 10번씩 움직임

2. 새(new) xylen 100%에서 다시 10번

3. 100%EtOH, 95%EtOH, 85%EtOH, 75%EtOH에서 10번씩

4. 찬물에서 10번, 새 찬물 10번, 새 찬물에 5분간 담그기

 

Antigen retrieval (unmasking)

-> 이 단계는 생략하고 했다가, 결과를 보고 실시 여부 결정

고정하는 동안 methylene bridge가 형성되어 단백질간 교차결합이 발생하므로 이를 실시해줌

 

1. buffer를 넣고 끓이기 ( 95도~100도) - citrate/ sodium citrate solutiion

2. 슬라이드를 넣고 10~40분간 담그기 - 시간은 최적의 사진이 나오는 것으로 조절

3. 상온에서 30분간 식히기 - 슬라이드에서 조직이 떨어지는 것을 막을 수 있음

4. TBS로 washing

 

staining 

1. 물기 제거 후, DAKO pen으로 marking

2. 3% H2O2 block solution을 떨어뜨리고 10분간 반응 (peroxidase blocking, 조직 내 H2O2가 임의적으로 반응하는 것을 막기위함)

3. 종이에 털고, 물에 잠기게 해서 흐르는 물에 5분간 washing

4. blocking 1시간 (ABC kit - normal horse serum/TBS-T5ml에 노란 라벨 한방울)

5. blocking serum 종이 타올로 제거

6. Primary antibody 1시간 처리

7. 항체 다시 수거 후 TBS-T로 washing 5분 (orbital shaker로 아주 약하게 rpm10정도)

8. secondary antibody 30분 처리

9. TBS-T로 washing5분

10. 미리 만든 VECTASTAIN ABC reagent 30분 반응

11. TBS-T 5분 washing

12. DAB solution 으로 원하는 정도로 발색될 때 까지 반응

13. 찬물에 5분간 살짝 흔들며 washing

 

Hematoxylin counter staining

1. hematoxylin 용액 점적 후 1분간 반응

2. 세척수가 무색이 될 때 까지 흐르는 물로 washing

3. acid rinse 용액에 넣고 10번 정도 위아래로 씻음 (선명하게 해줌)

4. 찬물에 10번 담갔다 빼기

 

mounting



출처: http://blog.naver.com/ji1004hye/190346406

[출처] IHC|작성자 완전찐해


괴사의 종류
어떤 원인이든 국소적인 세포의 집단적인 사망 즉 괴사가 발생하면 처음에는 육안적 으로는 물론 광학현미경적으로도 주위 조직과 잘 식별되지 않는다. 그러나 일정한 시간이 경과함에 따라 괴사를 초래하는 병인에 따라 몇가지의 특징적인 변화를 구별할 수 있다. 다시 말하면 괴사의 형태학적인 특징에 따라 손상의 원인을 알 수 있는 경우가 많다.

(1) 응고괴사
응고괴사(Coagulation necrosis)는 심근이나 신장경색과 허혈에 의한 저산소증, 수은중독시 신장의 요세관에서 특징적으로 관찰되는 단백의 변성으로 인하여 발생되는 괴사의 형태이다. 핵은 소실되고 세포질은 호산성으로 불투명하게 변하나 세포의 윤곽이 보존되어 원래 조직의 구조를 형태학적으로 인식할 수 있다는 점이 특징이다. 즉 경색부위를 현미경으로 관찰해도 그 장기에 나타나는 이유는 구조 단백질뿐만 아니라 단백을 분해하는 효소도 저산소증에 의하여 기능이 약화 또는 변성이 일어나므로 세포내 단백분해가 약화 또는 차단되어 세포 구조를 어느정도 시간까지는 유지할 수 있기 때문이다. 그러나 일단 응고괴사를 일으킨 세포는 일정 시간 경과후에 침윤된 백혈구나 주변의 손상된 세포 자체에서 생긴 단백질 분해효소의 작용으로 용해되고 제거된다.

(2) 액화괴사
액화괴사(Liquefaction necrosis)는 강한 가수분해 효소의 작용으로 일어난다. 이런 괴사는 세균과 백혈구에서 기원한 효소가 죽은 세포를 소화하기 때문에 죽은 세포나 조직이 액체화되어 농양(abscess)을 형성하면서 흔히 관찰되며 흔히 포도상구균과 같은 화농성 세균의 감염에 의하여 백혈구(호중구)의 침윤이 현저한 염증 병소에서 나타난다. 조직의 액화괴사의 결과는 소위 농(고름)이란 것인데 그것은 염증이 일어나 곳의 조직이나 침윤된 염증세포(백혈구)의 액화로 이루어진 조직액이라고 할 수 있으며 이것은 액화괴사의 대표적인 현상이다.
그러나 이러한 액화괴사가 일어나는 경우는 허혈성 괴사후에도 일어날 수 있다. 즉 뇌조직에서는 허혈성 괴사(뇌경색)후 그 부위의 뇌실질 조직에 액화괴사가 일어난다. 액화된 뇌조직이 흡수되면 그 공간은 결국 물과 조직 부스러기가 찬 낭성 구조 소위 라쿤(lacuna)이라고 하는 형태로 변하게되는데 이것은 뇌경색의 흔적으로 노인에서 흔히 발견된다.

(3) 건락괴사
건락괴사(Caseous necrosis)는 결핵감염 병소인 육아종의 중앙부에서 볼 수 있는 특징적인 괴사로서, 약간의 액화괴사를 동반한 응고괴사의 특징을 나타낸다.
이 괴사의 기전은 세포면역중 지연성 세포면역기전에 의해 발생되는 괴사이므로 이때 침윤된 대식 세포로부터 방출된 여러 가지의 소화효소에 의해 주변조직이 괴사된 결과로 나타난다. 육안적으로 치즈덩어리처럼 연하고, 부스러지기 쉬운 회백색의 밀가루 반죽 또는 치즈같이 보이므로 건락(치즈모양)괴사라고 묘사하고 있다. 이런 괴사는 결핵균의 막에 함유된 lipopolysaccharides에 대한 면역반응 때문에 상피모양으로 변형된 대식구 즉 유상피세포(상피모양세포, epithelioid cell)에서 기원한 단백분해효소에 의한다고 생각된다. 현미경으로 보면, 중심부의 조직은 완전히 액화되지는 않았으나 윤곽이 파괴되어 무구조의 과립성 부스러기로 보이므로 허혈성 응고괴사에서와 같이 조직의 형태를 구분할 수 없다.

(4) 지방괴사(Fat necrosis)
지방조식의 괴사를 뜻하며 기원에 따라 효소성과 비효소성(외상성)으로 나눌 수 있다.

① 효소성 지방괴사
리파제(lipase)와 같은 지방분해 효소에 의한 지방조직의 괴사이므로 효소성 지방괴사(Enzymatic fat necrosis)라고 하며 급성 췌장염에서 가장 흔히 관찰된다. 급성의 괴사성 염증에 의해 췌장의 활성화된 리파제(lipase)가 췌장 밖으로 방출되면 복강내 지방세포의 원형질막이 파괴되고 저장된 트리글리세라이드를 가수분해하여 유리지방산을 생성하게 된다. 방출된 지방산은 점차 칼슘과 결합하므로 현미경상 육안적으로 괴사부위에는 불투명하고 황색종괴 또는 백색의 침 전물(석회침착으로 인한 것)이 관찰된다. 현미경적으로 지방세포의 윤곽은 그림자처럼 보이고 무구조 의 과립상의 칼슘의 호염기성 침착(basophilic dept-sit)으로 보인다. 지질은 분해되며 병소는 염증세포의 침윤으로 둘러싸인다.

② 비효소성 지방괴
대표적인 경우가 외상성 지방괴사(traumatic fat necrosis)이다. 유방 지방조직에서는 외상에 의해 물리적인 지방세포의 괴사와 이때 동반되는 염증반응이 같이 나타난다. 그러나 항상 외상이 확인되는 것은 아니고 원인을 모를 때도 적지 않다.

(5) 괴저성 괴사
괴저성 괴사(Gangrenous necrosis)는 사지, 특히 하지에서 자주 관찰되며, 혈액공급이 차단된 후 혐기성 세균의 감염이 중복된 경우에 일어난다. 조직은 허혈성 손상으로 먼저 응고괴사가 일어나고 그후에 세균에서 만들어진 독소와 백혈구의 액화작용으로 손상부위에 이차적인 조직의 변형이 일어난다. 응고괴사의 소견이 우세하면 이를 건성괴저(dry gangrene)라고 하고, 반대로 액화괴사가 더 현저하면 습성괴저(wet gangrene)라고 부른다. 다른 부위에서도 심한 염증과 괴사가 함께 동반되는 경우도 이 용어를 진단에 사용하기도 한다. 예를들면 급성 괴저성 담낭염(acute gangrenous cholecystitis), 급성 괴저성 충수돌기염(acute gangrenous appendicitis)이라고 한다. 또 가스를 만드는 세균에 의한 감염으로 심한 괴사와 함께 가스형성이 동반된 경우를 가스괴저(gas gangrene)라고 한다.

(6) 섬유소성 괴사
일명 피브리노이드 괴사(fibrinoid necrosis)라고도 한다. 악성고혈압이나 면역성질환, 특히 결합조직 질환에서 혈관에 면역 복합체에 의해서 결합 조직이 파괴되는 괴사성 혈관염이 일어난 혈관 주위에 광학 현미경으로 언뜻보면 균질 무구조, 잘보면 혈중 섬유소와 같이 호산성 에오진 색소에 대한 염색성을 나타내는 균질한 물질의 침착이 일어난다. 이때 침착되는 물질은 섬유소(fibrin)를 포함하는 변성된 단백이며 이러한 물질의 침착을 동반하는 조직의 괴사를 섬유소성 괴사라고 한다. 따라서 혈관염을 동반한 면역성질환에서 흔히 관찰된다. 이 기전은 면역복합체가 혈관 벽에 침착되어 일어나므로 세포나 조직의 괴사와 함께 혈장 단백도 그 주변에 침착된다.

 

1. 피부 표면에서 진피를 거쳐 피하지방층까지 피부 전층을 자르는 생검법

진단을 위한 조직 채취만을 목적으로 하는 생검은 절개 생검이라고 한다.

 

2. 종양 또는 그 의증이 되는 부분 전체를 제거하는 경우를 절제 생검이라고 한다.

 

3. 주사기에 달린 바늘로 조직을 찔러서 내용을 빨아들여 묻어 나온 조직을 채취하여 검사하는 방법을

흡인 생검이라고 한다

 

4. 내시경 점막절제술

점막층,점막하층 ,근육층 ,장막층 / 용종 절제술 = 올가미로 잡아 절제하는 용종절제술이 대표적인예

 

4-1 내시경점막밑절제술  병변 부위의 점막 및 점막하층의 일부를 잘라내는 것입니다

 

 

 

 



체액성면역 : 항체생성 / B림프구
형질세포, 기억세포

세포성면역 : 독성 T세포 - 암세포 죽임

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