Bactria DNA,RNA 추출 protocoil

Bactria DNA추출 protocoil

0. 50ml에 bacteria

1.  pellet 1-5 ml bacteria overnight culture by centrifugation at > 5000 rpm for 5 min at room temperature 15-25＇c

펠렛에 1-5ml  박테리아를 하룻밤 배양  5000 rpm으로 원심 분리하여  15-25'c 실온에 5분간 방치

1-1 상층액을 겉어낸다.

2. resuspend pelleted bactria cells in 250 μl Buffer O1 abd transfer to a microcentrifuge tube.

250μl 의 세포 독성 세포를 완충액 p1(lysis buffer)  미세 원심 분리 튜브로 옮긴다.

3. add 250μl buffer p2 and mix thoroughly by inverting the tube 4-6 times. until the solution be comes clear Do not allow the lysis reaction to proceed for more than 5 min. if using lyseblue reagent, the solution will turn blue

 250μl  buffer p2(SDS buffer)를 넣고 10번 튜브를 뒤집어 완전히 섞는다. 용액이 깨끗해질 때까지.1분이상 지속하지않는다 용해반응이 생기기떄문에

lyseblue 시약을 사용하면 용액이 파란색으로 변함

4. add 350μl buffer N3 and mix immediately and thoroughly by inverting the tube 4-6 times. if using lyseblue reagent, the solution will turn colorless

350μl 버퍼 N3(초산)을 추가하고 튜브를 10번 뒤집어서 즉시 원심분리 5000rpm/10분 lyseblue 시약을 사용하면 용액이 무색으로 변함 (희석됨)

5. centrifuge for 10 min at 12,000 rpm in a table-top microcentrifuge

1분 실온에 둔다(뚜껑을닫아둔 상태에서) 미세 원심 분리기에서 12,000 rpm으로 10 분간 원심 분리한다.

6. apply the supernatant from step 5 to the Qiaprep spin column by deconting by decanting or pipetting Centrifuge 30-60s and discard the flow-through, or apply vacuum to the manifold to draw the solution through the QIAprep spin column and swithch off the vacuum source

5 단계의 상징액을 바른다. Qiaprep 스핀 컬럼(상층액넣기)에 붓거나 파이펫팅 30-60 초 원심 분리(12000rpm) 후  

진공을 가하여 용액을 흡입 후 QIAprep 스핀 칼럼 및 스위치 끔

7. recommended: wash the QIAprep spin column by adding 500 buffer PB centrifuge for 30-60s and discard the flow-through or apply vaccum to the manifold to draw the solution through the QIAprep spin column and switch off the vacuum source

NOTE: this step is only required when using end strains or other bacterial strains with high nuclease activity or carbohydrate content

QIAprep 스핀 컬럼에 PB버퍼를 500μl넣는다 30-60 초 동안 원심 분리(12000 rpm)하고 진공적용후 QIAprep 스핀 컬럼을 통해 용액을 꺼내고 진공 스위치를 끈다.

참고 :이 단계는 높은 변형률 활성 또는 탄수화물 함량이있는 최종 균주 또는 기타 박테리아 균주를 사용할 때만 필요합니다

8. wash the QIAprep spin column by adding 750μl buffer pecentrifuge for 30-60s and discard the flow-through or apply vacuum to the manifold to draw the solution through the QIAprep spin column, and switch off the vacuum source. Transfer the QIAprep spin column to the collection tube

750μl의 버퍼를 추가하여 QIAprep 스핀 컬럼을 세척한다.30-60 초 동안 원심 분리(12000rpm) 하고 유액을 버리거나 진공을 가하여 QIAprep 스핀 컬럼을 통

해 용액을 꺼내고 진공 원을 끈다. QIAprep 스핀 컬럼을 수집 튜브에 옮긴다.

9.centrifuge for 1 min to remove residual wash buffer

잔류 세척 버퍼를 제거하기 위해 1 분간 원심 분리한다. (빈 tube를 원심분리)

10. place the QIAprep column in a clean 1.5ml microcentrifuge tube. to elute DNA, add 500μl buffer EB(10m tris-cl , ph8.5) or water to the center of the QIAprep spin column, let it stand for 1 min, and centrifuge for 1 min

QIAprep 컬럼을 깨끗한 1.5ml 미세 원심 분리 튜브에 넣으십시오. DNA를 용리 시키거나 QIAprep 회전 컬럼의 중앙에 500μl 완충액

EB(10m tris-cl , ph8.5)  또는 물을 넣고 1 분 동안 정치시킨 다음 1 분간 원심 분리한다

11. MEASURE / spectro photometer (UV. 280nm)

측정/ 분광광도계

12.RUNNING GEL (agarnoge 1%)

13. Etbr(발색)

 

 

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1. 50ml bactria 배양

2.5000rpm 에서 centrifuze하고 상층액 버린다.

3. 250nl p1 buffer넣는다 (p1=lysis buffer)

4.새로운 1.5μl tube에 옮겨넣는다

5. invertiy 10회 (천천히)

6. p2 buffer 250 μl 넣는다.mix 하고 invertin (5분이하)

7. 350μl buffy N3 (초산) 넣고 mix inverting 10번 (천천히 , 5분이하)

8. 뚜겅을 닫고/ 1분동안 RT(실온) 보관하고 12000rpm centrifuse

9.분리된 상층액을 QIAprep spin coulum에 넣고 centrifuse

10. PE.sol 500μl 넣고 centri 12000/60초 (12000 60초 상층액 버린다 그러면 plasmid dna만 남는다)

11.pe.sol(Etor 성분) 750μl sjgrh 120000 centrifuse 60초

12. 상층액을 버린다

13. 비어있는 tube를 원심분리 (centri 12000 60초) (남아있는 Etor제거 위해)

14. 새로운 1.5ml tube에 옮긴다

15. EB buffer (10m tris -cl , ph 8.5) 500ul 넣는다. 실온에 1분간 방치

16.running gell (arolose/y)

17. Etbr (발색)