분자 3번째 실험 보고서

RNA Tirzol RNA 뽑는다

 

bacteria 1ml 딴다

bacteria cell down

원심분리 해준다 / 상층액 제거

trizol 500ul 넣고 파이펫팅 (인버팅 20~25회)

200 ul chloroform (1L :200) // 1:5 비율

vortxing or inverting (20~25회)

실온방치 5분

hy speed 4도 (12000rpm, 15min)

상층액 (clear부분만 따준다) // 200ul 파이펫 추천

새로운 튜브를 준비하여 넣어준다

iso prophenol 500ul 넣고 inverting (10~15회)

아이스박스에 넣고 10분 stand (온도 :4도)

원심분리 (12000rpm , 10min)

상층액을 제거해준다 (peper towea 깔고 튜브를 엎어준다)

DEPC 1ml (20ul) 넣어준다

in verting (펠렛을 잘모아주기 위해서)

원심분리 (10000rpm , 5min)

상층액 제거 (새로운 perper towea 깔고 엎어준다)

air – dry 과정해준다 (air-dry 기계를 작동하여 펠렛을 모아주고 4-5번 정도 긁어준다)

air- dry 한 Rna를 공기차단 (실험 플라스크에 넣고 15분 방치)

진공 방치된 Rna를 꺼내어 DEPC (DW) 20ul 넣고 100회 (파이펫팅)해준다

석영 50ul (260nm – 280nm) 실험 시작

1.5ml tube (DEPC 50ul) // RNA (2ul) = 26배 희석 , 블랜크를 제거 시켜준다

260/280 = 1.8 ↑ 이면 잘 뽑힌 것

18ul => gel runing